单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于免疫抗体种类特女性朋友、寡核苷酸表达成本预算高亢或操作使用流程复杂的。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯老师团队图片在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低人工成本、跨鱼类、全APP兼容的全新解决方案。

期刊论文简单介绍

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由国人科学有效合理实验院隐性基因基因性与發育怪物学实验所和国人隐性基因基因性针灸学会举办的國际科研讨论杂志中文核心学术期刊杂志，倾力于消息海洋生物工程科学有效合理实验和医药学隐性基因基因性学范畴的国内 散文网性实验重大成就。JGG 2021年度影向细胞因子7.1，Scopus科研讨论杂志中文核心学术期刊杂志点评标准CiteScore 9.9，排名第JCR 2021年度GENETICS & HEREDITY范畴Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY范畴Q1区，排名第国人科学有效合理实验院杂志中文核心学术期刊杂志系统分割怪物学类别1区(Top杂志中文核心学术期刊杂志)，隐性基因基因性学和海洋生物化与团伙怪物学小类双1区。

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那些是HEATag

正确的“二融合”构思

HEATag是由凝集素和HUH内切酶组成部分的凝固球蛋白

「位置定位器」接口 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化装饰（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「衔接器」模快 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）检索条状码实现共价相连。

“1+1>2”的视觉效果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行模板标记图片与朔源。

Fig1: HEATag几吨标签的原理表示图

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实际的测试

HEATag究竟有大多能打？

应该在有所差异必备条件下，推动蒲乳期动植物上皮癌细胞系单上皮癌细胞混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研究探讨创业团队为 HEATag 设施了多轮 “学习抗压测试测试”，从神经元系到神经元核，从干燥到温度过低，从新鲜样例到一定样例，全方面认证它的维持性和可信度性。

第一次轮测式针对性喂乳两栖动物神经元系系：研发技术人员采用了来源人、鼠、仓鼠几个动物群的多种神经元系（HEK293T、K562、MEF、CHO），在恒温使用 HEATag 箭头后混和测序。进而再利用的 11447 个神经元系中，85.66% 都能用 HEATag 长形码更准识别到原动物群，子样本间相交弄脏很少，UMAP 聚类进行分析进行分析更加是进行说明，HEATag 长形码与动物群特男人基因遗传组症状高速不一。 完了，各种测试经济先决水平进一次提高：研究探讨工作员测试在 4℃下标签纸新的体癌组织肿瘤血细胞、在环境温度下标签纸甲醇一定好体癌组织肿瘤血细胞，还一直标签纸体癌组织肿瘤血细胞结构。最终报告单一样出众：整个经济先决水平下，样品标签纸与植物物种企业信息均兼有很好的的关于性，切分确切率超 95%。虽然甲醇一定好会导致较轻的转录本交叉的情况污染破坏，体癌组织肿瘤血细胞结构制得有少量的 RNA 外流，体癌组织肿瘤血细胞内型的注解最终报告单一样与新的样品坚持一样，证明怎么写 HEATag 可标签纸不一样办理经济先决水平下的试验样品。

Fig2: HEATag 可在各个状态下进行单細胞转录组混样浅析

也能标上辅乳植物和深海无脊椎骨植物的原代血细胞

如果你人体细胞核系公测是 “知识基础题”，那聚集范例正是 “额外题”， 这一些范例并不因人体细胞核形式非常复杂、学习环境转变性层次性，称得上标记符号技术性的 “要点”，而 HEATag 正好在这一些 “要点” 上能够 了优劣势。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸安排，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞并不是能被更准界定，其它主要是癌细胞内型的聚类分析的结果都分明可辨。

更令人惊喜的是HEATag对深海生态学的自适应性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 方形码与植物物种转录组拥有较高统一性，也没有经常出现因高盐自然环境会导致的 “标示报废”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可达到乳期节肢动物团队模本多个 scRNA-seq 分享

Fig4: HEATag可实行优质海洋资源无脊梁骨各种动物多方面 scRNA-seq 分享

HEATag与组织的根据不会轻易致使转录组的可观改动

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在做完箭头责任的时，不想对下一步的转录多组分析容易造成侵扰，保护了实验数据文件的最真实度。

Fig5: HEATag不容易引响样例的 RNA 表示策略

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今后可期

HEATag 能为单细胞膜设计面临什么样？

HEATag 的价值量，远只有于 “搞定标注问题”，它的灵灵敏性高性和共通性，在为单人体细胞设计浏览器打开其他或许性

从广泛应用场地来讲

HEATag 能覆盖住从 “简便很剖析”（如癌策划 性与合适策划 性、中药整理与相较比较）到 “大投资额探析”（如策划 性肿瘤体细胞图谱设计、高通骁龙量选择）的全范畴消费需求。跟随着 PIP-seq、Stereo-cell 等一种新型可优化水平的发展进步，HEATag 还能进的一步大幅提升单肿瘤体细胞探析的通量，助推器科研建设项目开发团队进行更好 投资额的建设项目。

从跨邻域潜力股看来

HEATag 不禁支持于转录组学，还能与表观表观遗传组学、淀粉酶质组学、空间区域组学等系统结合在一起，经过私人定制字段和寡核苷酸队列，HEATag 可能方便融进了 其他的组学步奏，不印象手机信号获取淬硬层。还，针对HEATag还可能成长 单组织糖组学科学研究系统。

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进行合作情况

拜谱微生物与陈凯老师达到目标初阶段公司合作意想

什么值得点赞的是，在 HEATag 技艺展示出不可估量使用潜能的情况下，拜谱生态学已与江西地区浮游生态学地理学与过程中江西實驗操作室（南京）陈凯教受达到目标逐项合作关系有意向的客户。另一方进度表紧紧围绕 HEATag 技艺的产业发展化实施、教育科学研究课题被转化等目标拉开长度协同合作，带动这样低制造费、跨鱼类的单生殖生殖内部标记图片技艺快点使用于其实教育科学研究课题情景，为大多實驗操作室带来快速、城市发展的单生殖生殖内部研究探讨的工具，电子助力教育科学研究课题工作任务者在生殖生殖内部生态学学、浮游生态学生态学学、皮肤疾病机理等各个领域获得大多上升