肉的宰后嫩化通常归因于肌原玻纤素构成的严重破坏，肌原玻纤素构成是由内源性球球淀粉酶酶酶质电离酶溶解塑料肌原玻纤素和组织组织受损癌细胞系骨架球球淀粉酶酶酶质出现的。与几百年来一直都是关注新闻视角的钙球球淀粉酶酶酶质酶不同的，胱天球球淀粉酶酶酶质酶（caspases）最近几天形成感欲望搞笑的话题。胱天球球淀粉酶酶酶质酶在组织组织受损癌细胞系凋亡的制定一阶段起着至关根本的目的，这之中caspase-3在人死之后球球淀粉酶酶酶质电离中的目的是供需双各方面和更复杂的，以至于什么值得进第一步理论论述。S-亚硝基化根据设定钙释放出、势能代谢率、球球淀粉酶酶酶质质溶解塑料和组织组织受损癌细胞系凋亡来设定吃起来，有嫩度和持水效率。先前理论论述得知S-亚硝基化可再降依赖感线粒体的caspase-3级联现象，这概率是身体肌肉组织组织受损癌细胞系凋亡和牛肉片产品波动的根本原因。caspase-3的理论论述省级重点是其与组织组织受损癌细胞系凋亡的相互影响，虽然，都不有理论论述浅论S-亚硝基化设定caspase-3的机理。

2024年9月由深圳绿植基地高校张万刚专家教授拜谱生物在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生态学为该研究提供了亚硝基化掩盖组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文名字小标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

中文核心期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202多年的影响系数：5.7

发稿周期：2024年9月

企业的单位：南京农业大学

理论研究的材料：蛋白

拜谱提拱系统：亚硝基化修饰组学

技术性途径：

一、调查结果显示

01.Caspase-3亲水性

当下尚不清NO对caspase-3的减缓的功效可不可以归因于NO介导的S-亚硝基化，与众不同浓度值系数的GSNO最为外源性NO产生，以引发caspase-3的身体之外S-亚硝基化。成果呈现，与就没有GSNO的组较之，100、200和400μM GSNO组的caspase-3可溶性有明显减少（图1），与原本新闻稿同步。GSNO清理减少caspase-3可溶性的不确定性原故仍亟需确立。

图1 不一样的溶度的GSNO工作对caspase-3特异性的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化的情况

深入分析Caspase-3的亚硝基化的情况，以展现GSNO对Caspase-3的不起作用性。经GSNO正确处理后，检侧到caspase-3淀粉酶S-亚硝基化因素扩大（图2）。以下结局得出结论，外源性GSNO培养计划可完成诱导型caspase-3的身体S-亚硝基化。从未有过惊艳的是，在没得GSNO留存的比较组中检侧到一位不大的S-亚硝基化带，这得出结论caspase-3可能性发生内源性的S-亚硝基化。不仅如此，本深入分析中caspase-3的S-亚硝基化的情况较高，而caspase-3的活性氧削减，这与的时候的深入分析同一。同时，caspase-3的非特异聊天S-亚硝基化装饰位点尚不清析，还需进1步的生命的进化。

图2 GSNO治理对caspase-3S-亚硝基化层次的反应

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化绘制组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码队列。淡蓝色标示的编码队列数字代表S-亚硝基化肽，粉红色标示的C数字代表S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3分解结球蛋白

结淀粉酶质质质质充当另外一种首要的生殖細胞骨架淀粉酶质质质质，在恢复肌生殖細胞设备构造的设备构造系统性和伸缩性部分起着首要使用，研究方案S-亚硝基化caspase-3对结淀粉酶质质质质分解的比较敏单纯拥有首要作用。与Std（未用胱天淀粉酶质质质质酶-3和GSNO孵育的缺省肌玻璃纤维板淀粉酶质质质质）组比起来，0 μM GSNO组（肌原玻璃纤维板和caspase-3的孵育，无GSNO）的系统结淀粉酶质质质质量可观较低，信息提示caspase-3对结淀粉酶质质质质拥有隐藏的淀粉酶质质质质水解反应功能。在GSNO孵育后，系统结淀粉酶质质质质的量比较突出增强（P < 0.05）。因此，当GSNO浓硫酸浓度变高时，系统结淀粉酶质质质质的量定期上涨（P < 0.05）（图5）。上述遇到呈现，SNO体现的caspase-3以技术依赖症的模式可抑制结淀粉酶质质质质的分解。

图5.S-亚硝基化caspase-3化学降解结蛋清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3挥发肌钙淀粉酶-T

肌钙核核血清质-T (TnT)是原肌球核核血清质自动调低担任肌群缩小的细条的也要肌原弹性纤维材料板核核血清质。TnT的可生物挥发功能是检则到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化先决条件下，caspase-3对TnT的可生物挥发时候就像文中6图甲中，与Std组（不含有caspase-3和GSNO的肌原弹性纤维材料板）相对来说，caspase-3组中30 kDa TnT段落重要增高，呈现caspase-3参入了TnT的可生物挥发，虽然，caspase-3与GSNO的孵育以至于30 kDa TnT急剧下降。在100和200 μM GSNO组区间内不检则到很大的差别的(P > 0.05)，而当GSNO的有机废气浓度提升400 μM 时，该段落重要减轻(P < 0.05)。等等看见呈现了SNO呈现的caspase-3对TnT可生物挥发的抑加工制功能功能。结核核血清质和TnT是caspase-3的铭感底物，而GSNO整理有效调低caspase-3的可溶性几率以至于肌原弹性纤维材料板核核血清质可生物挥发程度上有效调低。综合上面的上述，NO诱导性的S-亚硝基化能能能够 呈现半胱氨酸残基来自动调低caspase-3的可溶性，而使进十步不良印象其对结核核血清质和TnT的核核血清质淀粉水解能力素质，然而不良印象牛羊肉口感。

图6. S-亚硝基化caspase- 3光降解肌钙球蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本设计我委研究综述S-亚硝基化对caspase-3突显的影晌以及其那么对牛羊肉肌原钎维身体之外光降解的影晌。核淀粉酶S-亚硝基化能突显caspase-3的半胱氨酸残基，故而产生caspase-3化学活化大幅度降低，进一歩控制了其对牛羊肉肌原钎维核淀粉酶的核淀粉酶淀粉水解业务能力。

三、拜谱工作小结

的研究探讨运用了酶活法测定，亚硝基化绘制组学定量分析，WB等在线检测方法手段，察觉球血清S-亚硝基化行绘制caspase-3的半胱氨酸残基，这会造成了caspase-3催化活性的大大减少，齐头并进的一步压制了其对牛羊肉肌原食物纤维球血清的球血清电离技能。本的研究探讨为回答球血清质亚硝基化对肉肥的改善逻辑作为一个多个新的第一人称视角。

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符合文献综述：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663